微生物檢驗(yàn)的基本操作技術(shù)匯總應用提升！

無(wú)菌操作基礎(chǔ)知識(shí)

一特點、無(wú)菌操作技術(shù)

1相互配合、定義　

是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無(wú)菌物品及無(wú)菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法品質；

無(wú)菌操作技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)積極回應，是保證微生物實(shí)驗(yàn)和順利完成的重要環(huán)節(jié)。

2深化涉外、內(nèi)容

無(wú)菌操作技術(shù)主要包括兩方面：

1）創(chuàng)造無(wú)菌的培養(yǎng)環(huán)境全會精神。包括密閉的培養(yǎng)容器又進了一步、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等多元化服務體系；

2）在操作和培養(yǎng)過(guò)程中防止一切其它微生物的侵入的措施實力增強。包括紫外線(xiàn)殺菌、甲醛熏蒸深度、凈臺(tái)的消毒與檢測(cè)重要工具、操作工具提供有力支撐、器皿滅菌發展成就、操作方法等優勢。

3協調機製、無(wú)菌操作原則

1）在執(zhí)行無(wú)菌操作時(shí)高質量發展，必須明確物品的無(wú)菌區(qū)和非無(wú)菌區(qū)攻堅克難，接種時(shí)必須穿工作服相關、戴工作帽影響力範圍，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手雙向互動，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦?/span>

2）在操作前20～30分鐘要先啟動(dòng)凈臺(tái)和紫外燈設計，進(jìn)行接種所用的吸管主動性、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌範圍，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用道路，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。嚴(yán)禁用手直接拿無(wú)菌物品科技實力，如瓶塞等開展試點，而必須用消毒的鉗、鑷子等可靠保障；

3）從包裝中取出吸管時(shí)規劃，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)共同，吸管尖不能觸及試管或平皿邊發展；

4）接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作在此基礎上，接種細(xì)菌或樣品時(shí)推進一步，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒；

5）接種環(huán)或接種針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲多種，必須時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處發行速度；

6）吸管吸取菌液或樣品時(shí)極致用戶體驗，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取強大的功能，不得直接用口吸。傾倒平板應(yīng)在凈臺(tái)內(nèi)操作充分發揮，并且在開(kāi)啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒與時俱進。

二應用、無(wú)菌操作的環(huán)境要求

1、無(wú)菌室

（1）無(wú)菌室的結(jié)構(gòu)：更衣間更優質、緩沖間成就、操作間；

（2）無(wú)菌室的消毒和防污染

?每日（使用前）紫外線(xiàn)照射（0.5~1小時(shí)）項目；

?每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒相對開放；

?每季度用甲醛、乳酸綜合運用、過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)）相貫通，特殊情況下可增加熏蒸頻次。

（3）無(wú)菌室使用要求

①無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔脫穎而出，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒系統，拭擦工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品積極影響；

②無(wú)菌室使用前后應(yīng)將門(mén)關(guān)緊方法，打開(kāi)紫外線(xiàn)，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)豐富，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min善於監督，使用紫外燈深刻認識，應(yīng)注意不得直接在紫外線(xiàn)下操作，以免引起損傷管理，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦新型儲能，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線(xiàn)穿透的影響應用提升；

③處理和接種食品標(biāo)本時(shí)不同需求，進(jìn)入無(wú)菌室操作，不得隨意出入新品技，如需要傳遞物品發展空間，可通過(guò)小窗傳遞。在無(wú)菌室內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)保持穩定，則應(yīng)有過(guò)濾裝置就此掀開。

2、凈工作臺(tái)

凈臺(tái)的使用與保養(yǎng)：

（1）風(fēng)速穩(wěn)定，且符合要求總之；

（2）使用前開(kāi)啟紫外燈照射30分鐘以上；

（3）讓凈臺(tái)預(yù)工作10－15分鐘紮實做；

（4）使用完畢后足了準備，用70%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈規模設備。

3、無(wú)菌器材

（1）滅菌器材：玻璃器皿穩步前行、培養(yǎng)基至關重要、無(wú)菌衣等；

（2）消毒器材：無(wú)菌室內(nèi)的凳子指導、試管架建設項目、天平、工作臺(tái)服務品質、手等增強。

（3）無(wú)菌間一般只允許放置無(wú)菌操作臺(tái)、轉(zhuǎn)椅等物品結果；無(wú)菌操作臺(tái)上一般只允許擺放以下物品： 酒精燈大部分、打火機(jī)、接種針將進一步、消毒棉球更加堅強、洗耳球、鑷子實際需求、油性筆配套設備、滅菌平皿、試管架性能、滅菌吸管建議、電子天平、250ml滅菌三角瓶設計、培養(yǎng)基、均質(zhì)器等。

三善謀新篇、無(wú)菌操作的基本技術(shù)

1推進高水平、無(wú)菌接種操作

培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品供給、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上不斷發展，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。

在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。

2、微生物檢驗(yàn)過(guò)程中的無(wú)菌操作要求

（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作研究進展；

（2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放；

（3）在正火焰上方操作行動力；

（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌提升；

（5）在接種培養(yǎng)物時(shí)持續，協(xié)作應(yīng)輕情況、準(zhǔn)；

（6）不能用嘴直接吸吹吸管高品質；

（7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒互動講。

3統籌、無(wú)菌操作技術(shù)詳細(xì)圖解

（1）取菌技巧

（2）接種技巧

（3）錯(cuò)誤示范

微生物的接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù)

一支撐能力、接種

1發展、接種定義

接種：將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。

2範圍、接種工具

在實(shí)驗(yàn)室中效果，用得zui多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時(shí)滴管求得平衡、吸管也可作為接種工具進(jìn)行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時(shí)道路，需要用到涂布棒面向。

1．接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

3、微生物檢驗(yàn)常見(jiàn)接種方法

（1）劃線(xiàn)接種法

平板劃線(xiàn)分離法--分區(qū)劃線(xiàn)分離法

①用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線(xiàn)空間廣闊，再在2合作關系、3&#823&#823區(qū)依次劃線(xiàn)；

②每劃完一個(gè)區(qū)域研學體驗，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70度角結構不合理，并將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域深刻內涵；

③每一區(qū)域的劃線(xiàn)均接觸上一區(qū)域的接種線(xiàn)1～2次十分落實，使接種量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落逐步顯現；

④其他操作與上述曲線(xiàn)劃線(xiàn)分離法相同作用。

（2）斜面接種法

主要用于經(jīng)劃線(xiàn)分離培養(yǎng)所獲得的單個(gè)菌落的移種，以及觀察細(xì)菌的某些培養(yǎng)特征近年來。

以菌種移種為例銘記囑托，其接種方法是：

①取一菌種管和培養(yǎng)基管，置左手食指交流等、中指製造業、無(wú)名指間，拇指壓住兩管底部上側(cè)面自動化裝置，使菌種管位于外側(cè)狀態，培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè)規劃；

②右手拇指和食指分別旋松兩管棉塞「嗟暮献鳈C會；鹧鏈缇臃N環(huán)應用前景；

③以右手小指與手掌，小指與無(wú)名指分別夾取棉塞（先外管后內(nèi)管）重要方式，將兩管口迅速通過(guò)火焰1~2次綜合運用；

④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中，從斜面上取菌少許增產，迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中脫穎而出，在斜面底部向上劃一條直線(xiàn)，然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線(xiàn)的方法，直至斜面上方頂端積極影響；

⑤取出接種環(huán)，火焰滅菌管口生產創效，塞上棉塞（先塞內(nèi)管）進一步提升；zui后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好；

⑥做好標(biāo)識(shí)集成，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時(shí)規模最大。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面、透明度重要手段、色澤等特征。

（3）涂布接種法

涂布法接種是一種常用的接種方法橫向協同，不僅可以用于計(jì)算活菌數(shù)不折不扣，還可以利用其在平板表面生長(zhǎng)形成菌苔的特點(diǎn)用于檢測(cè)化學(xué)因素對(duì)微生物的抑殺效應(yīng)。

原理：將一定濃度穩定性，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上最深厚的底氣，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長(zhǎng)出單菌落而達(dá)到分離的目的資源優勢。

（4）液體接種法（肉湯接種）

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管應用擴展；

②滅菌接種環(huán)，從菌種管取菌振奮起來，伸入培養(yǎng)基管中建立和完善，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和增多，使細(xì)菌混合于培養(yǎng)基的液體中啟用。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時(shí)培養(yǎng)后觀察生長(zhǎng)特征。

肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項(xiàng)：

a.發(fā)育程度：有無(wú)生長(zhǎng)、微弱活動上、中等穩步前行、旺盛；

b.混濁度：有無(wú)及程度（混著力提升、中等指導、微混、透明）良好、均勻混濁雙重提升、有顆粒增強、絮狀生長(zhǎng)倍增效應；

c.沉淀：有無(wú)及量多少、性狀（粉狀戰略布局、顆粒狀重要意義、絮狀、沾性）講道理；

d.表面：有無(wú)生長(zhǎng)引領、性狀（膜狀、環(huán)狀）更加廣闊、菌膜厚薄及表面特征（光滑優化服務策略、顆粒、皺狀）示範；

e.其他：有無(wú)特殊氣味技術節能，色素。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無(wú)氣體發展基礎。

（5）穿刺接種法（半固體接種）

多用于保存菌種延伸、觀察動(dòng)力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細(xì)菌的某些生化反應(yīng)。

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管要求；

②以滅菌接種針從菌種管取菌，垂直刺入培養(yǎng)基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達(dá)近管底部（但不能刺到管底），接種針應(yīng)沿原路退出運行好；

③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到：沿穿刺線(xiàn)生長(zhǎng)國際要求，線(xiàn)外的培養(yǎng)基清亮表示細(xì)菌無(wú)動(dòng)力；穿刺線(xiàn)模糊不清同期，或沿穿刺線(xiàn)向外擴(kuò)散生長(zhǎng)新趨勢，或整個(gè)培養(yǎng)基混濁表示細(xì)菌有動(dòng)力。

二共同努力、分離純化

1保持競爭優勢、幾個(gè)定義

混和培養(yǎng)物：含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱(chēng)為混和培養(yǎng)物（Mixed culture）；

純培養(yǎng)：如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來(lái)自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱(chēng)為純培養(yǎng)（Pure culture）情況；

分離純化：在進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物，得到純培養(yǎng)的過(guò)程稱(chēng)為分離純化等多個領域。包括傾注平板法互動講、涂布平板法、平板劃線(xiàn)法等等哪些領域。

2支撐能力、傾注平板法（倒平板）

將無(wú)菌培養(yǎng)皿放入生物安全柜或凈化臺(tái)中，然后分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基像一棵樹，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿協同控製，使培養(yǎng)基均勻分布，待凝固之后高效利用，把這平板倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)體驗區。單一細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液品質，重復(fù)上述步驟數(shù)次提供了遵循，便可得到純培養(yǎng)物。整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作能運用。

三利用好、微生物的培養(yǎng)方法

微生物的生長(zhǎng)，除了受本身的遺傳特性決定外講理論，還受到許多外界因素的影響有望，如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度最為顯著、水分滿意度、氧氣、pＨ等生產能力。微生物的種類(lèi)不同智慧與合力，培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同。通常分為：

1可持續、一般培養(yǎng)法（需氧培養(yǎng)）    

培養(yǎng)溫度：25~37℃ 措施。

2、厭氧培養(yǎng)方法

（1）簡(jiǎn)易的厭氧培養(yǎng)法：

A情況、庖肉培養(yǎng)法

B交流等、鐵絲圈厭氧培養(yǎng)法

C、焦性沒(méi)食子酸法

（2）厭氧罐法

（3）厭氧手套箱法

厭氧缸法：

厭氧缸是普通的干燥缸發展目標奮鬥，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境自動化裝置，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來(lái)。

接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)關規定。

厭氧罐法：

裝入待培養(yǎng)的對(duì)象更多的合作機會，然后密閉罐蓋，接著可采用抽真空&#8594灌氮&#8594抽真空&#8594灌氮&#8594抽真空&#8594灌混合氣（N2∶CO2∶H2=80∶10∶10指導，V/V）可以使用。

3、二氧化碳培養(yǎng)法

（1）燭缸法

（2）二氧化碳置換法

（3）化學(xué)法

每一升用重碳酸鈉0.4克與濃鹽酸0.35亳升加入關註點。

（4）二氧化碳培養(yǎng)箱法

四廣泛認同、微生物常規(guī)鑒定技術(shù)

1、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察

（1）在固體培養(yǎng)基上建強保護，觀察：

菌落大小服務好、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）增持能力、光澤度應用領域、透明度創新為先、質(zhì)地提高鍛煉、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等行業內卷；

（2）在液體培養(yǎng)中：

表面生長(zhǎng)情況（菌膜進行培訓、環(huán)）混濁度及沉淀等；

（3）半固體培養(yǎng)基穿刺接種：

觀察運(yùn)動(dòng)凝聚力量、擴(kuò)散情況關鍵技術。

2、染色鏡檢

（1）染色原理

由于微生物細(xì)胞含有大量水分，機(jī)體是無(wú)色透明的有所提升，與周?chē)尘皼](méi)有明顯的反差， 必須進(jìn)行染色參與能力，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差法治力量，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

微生物中細(xì)菌應用擴展、致病菌是很小的生物體過程中，必須通過(guò)染色的方法，在顯微鏡下才能看得清楚建立和完善，并且還可以通過(guò)染色的方法鑒別革蘭氏染色特性特征更加明顯，以及是否長(zhǎng)有鞭毛、周毛啟用、莢膜和芽孢等。

（2）染色方法

①簡(jiǎn)單染色法

簡(jiǎn)單染色法又叫作普通染色法，只用一種染料使細(xì)菌染上顏色，觀察細(xì)菌的形態(tài)達到。

②復(fù)染色法

用兩種或多種染料染細(xì)菌等地，目的是為了鑒別不同性質(zhì)的細(xì)菌，所以又叫鑒別染色法數字技術。主要的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法共享應用。

（3）革蘭氏染色法

①原理

革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立尤為突出。

染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱(chēng)為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌情況較常見，用G+表示；

染色反應(yīng)呈紅色的稱(chēng)為革蘭氏陰性細(xì)菌標準，用G―表示喜愛。

細(xì)菌對(duì)革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的主要抓手。

②細(xì)菌的革蘭氏染色步驟

涂片&#8594干燥&#8594固定&#8594初染&#8594水洗&#8594媒染&#8594水洗&#8594脫色&#8594水洗&#8594復(fù)染&#8594水洗&#8594干燥&#8594觀察

A）取培養(yǎng)物分別做涂片保障、干燥、固定空間載體，方法均與簡(jiǎn)單染色的相同體製；

B）用草酸銨結(jié)晶紫染色1min后水洗；

C）加碘液媒染1min后水洗即將展開；

D）斜置載玻片向好態勢，滴加95％乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止創新科技，大約需時(shí)20～30s更默契了，隨即水洗；

E）用蕃紅染液復(fù)染30s服務機製，水洗流程；

F）用吸水紙吸掉水滴，待標(biāo)本片干后置顯微鏡下認為，用低倍鏡觀察運行好，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細(xì)菌細(xì)胞的顏色各領域。