微生物檢驗的基本操作技術匯總

一情況、無菌操作技術

1精準調控、定義　

是指在執(zhí)行實驗過程中品質，防止一切微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術和管理方法等形式；

無菌操作技術是微生物實驗的基本技術資料，是保證微生物實驗和順利完成的重要環(huán)節(jié)投入力度。

2更適合、內(nèi)容

無菌操作技術主要包括兩方面：

1）創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境。包括密閉的培養(yǎng)容器長效機製、培養(yǎng)容器的滅菌進一步意見、培養(yǎng)基的滅菌等重要部署；

2）在操作和培養(yǎng)過程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌集聚、甲醛熏蒸高效化、凈臺的消毒與檢測大大提高、操作工具新的動力、器皿滅菌、操作方法等調整推進。

3為產業發展、無菌操作原則

1）在執(zhí)行無菌操作時，必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)發展契機，接種時必須穿工作服穩定、戴工作帽，應在進無菌室前用肥皂洗手齊全，然后用75%酒精棉球將手擦干凈廣泛關註；

2）在操作前20～30分鐘要先啟動凈臺和紫外燈，進行接種所用的吸管機製、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌各項要求，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用發力，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼3次后使用優勢與挑戰。嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等越來越重要的位置，而必須用消毒的鉗問題分析、鑷子等；

3）從包裝中取出吸管時不負眾望，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時交流研討，吸管尖不能觸及試管或平皿邊改善；

4）接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作最新，接種細菌或樣品時發揮重要作用，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；

5）接種環(huán)或接種針在接種細菌前應經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲模樣，必須時還要燒到環(huán)和針與桿的連接處取得顯著成效；

6）吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取數據顯示，不得直接用口吸責任。傾倒平板應在凈臺內(nèi)操作服務，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。

二持續向好、無菌操作的環(huán)境要求

1舉行、無菌室

（1）無菌室的結構：更衣間、緩沖間不容忽視、操作間習慣；

（2）無菌室的消毒和防污染

•每日（使用前）紫外線照射（0.5~1小時）；

•每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進行消毒組建；

•每季度用甲醛覆蓋、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）進展情況，特殊情況下可增加熏蒸頻次重要的作用。

（3）無菌室使用要求

①無菌室內(nèi)應保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒研究，拭擦工作臺面搶抓機遇，不得存放與實驗無關的物品；

②無菌室使用前后應將門關緊去創新，打開紫外線結論，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時，需30W紫外燈品質，距離在1.0m處積極回應，照射時間不少于30min，使用紫外燈深化涉外，應注意不得直接在紫外線下操作全會精神，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦又進了一步，除去上面灰塵和油垢智能化，以減少紫外線穿透的影響；

③處理和接種食品標本時狀況，進入無菌室操作範圍和領域，不得隨意出入，如需要傳遞物品業務，可通過小窗傳遞。在無菌室內(nèi)如需要安裝空調時，則應有過濾裝置完善好。

2促進進步、凈工作臺

凈臺的使用與保養(yǎng)：

（1）風速穩(wěn)定，且符合要求全過程；

（2）使用前開啟紫外燈照射30分鐘以上更高要求；

（3）讓凈臺預工作10－15分鐘積極參與；

（4）使用完畢后，用70%酒精將臺面和臺內(nèi)四周擦拭干凈經驗分享。

3探討、無菌器材

（1）滅菌器材：玻璃器皿、培養(yǎng)基培養、無菌衣等共創美好；

（2）消毒器材：無菌室內(nèi)的凳子、試管架使用、天平分析、工作臺、手等不難發現。

（3）無菌間一般只允許放置無菌操作臺、轉椅等物品聽得懂；無菌操作臺上一般只允許擺放以下物品： 酒精燈推動、打火機、接種針設備製造、消毒棉球有效性、洗耳球、鑷子資源配置、油性筆形勢、滅菌平皿、試管架機遇與挑戰、滅菌吸管高效節能、電子天平、250ml滅菌三角瓶能力和水平、培養(yǎng)基組織了、均質器等。

三註入了新的力量、無菌操作的基本技術

1表現、無菌接種操作

培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌材料（如樣品說服力、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上的積極性，這個過程叫做無菌接種操作。

在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作深刻變革。

2高效、微生物檢驗過程中的無菌操作要求

（1）在操作中不應有大幅度或快速的動作；

（2）使用玻璃器皿應輕取輕放應用的選擇；

（3）在正火焰上方操作效率；

（4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；

（5）在接種培養(yǎng)物時十大行動，協(xié)作應輕重要性、準；

（6）不能用嘴直接吸吹吸管體系；

（7）帶有菌液的吸管系統穩定性、玻片等器材應及時置于盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。

3多種場景、無菌操作技術詳細圖解

（1）取菌技巧

（2）接種技巧

（3）錯誤示范

微生物的接種科技實力、分離純化和培養(yǎng)技術

一、接種

1集中展示、接種定義

接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種可靠保障。

2、接種工具

在實驗室中建設，用得zui多的接種工具是接種環(huán)共同、接種針。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種在此基礎上。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時，需要用到涂布棒集成應用。

1．接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

3越來越重要的位置、微生物檢驗常見接種方法

（1）劃線接種法

平板劃線分離法--分區(qū)劃線分離法

①用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線，再在2迎來新的篇章、3……區(qū)依次劃線解決方案；

②每劃完一個區(qū)域，轉動培養(yǎng)皿約70度角學習，并將接種環(huán)滅菌一次技術，待冷后再劃下一區(qū)域；

③每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1～2次，使接種量逐漸減少結構重塑，以獲得單個菌落；

④其他操作與上述曲線劃線分離法相同空白區。

（2）斜面接種法

主要用于經(jīng)劃線分離培養(yǎng)所獲得的單個菌落的移種貢獻法治，以及觀察細菌的某些培養(yǎng)特征。

以菌種移種為例應用優勢，其接種方法是：

①取一菌種管和培養(yǎng)基管相對較高，置左手食指、中指、無名指間創新內容，拇指壓住兩管底部上側面全方位，使菌種管位于外側，培養(yǎng)基管位于內(nèi)側實踐者；

②右手拇指和食指分別旋松兩管棉塞管理。火焰滅菌接種環(huán)豐富；

③以右手小指與手掌，小指與無名指分別夾取棉塞（先外管后內(nèi)管），將兩管口迅速通過火焰1~2次善於監督；

④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中大局，從斜面上取菌少許，迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中數據，在斜面底部向上劃一條直線效率和安，然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線，直至斜面上方頂端應用提升；

⑤取出接種環(huán)不同需求，火焰滅菌管口相互配合，塞上棉塞（先塞內(nèi)管）統籌發展；zui后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好；

⑥做好標識積極回應，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時慢體驗。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面全會精神、透明度左右、色澤等特征。

（3）涂布接種法

涂布法接種是一種常用的接種方法智能化，不僅可以用于計算活菌數(shù)生產製造，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用于檢測化學因素對微生物的抑殺效應。

原理：將一定濃度綜合措施，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上多元化服務體系，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長出單菌落而達到分離的目的攜手共進。

（4）液體接種法（肉湯接種）

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管實力增強；

②滅菌接種環(huán)，從菌種管取菌擴大公共數據，伸入培養(yǎng)基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養(yǎng)基液體調和設計標準，使細菌混合于培養(yǎng)基的液體中深度。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時培養(yǎng)后觀察生長特征助力各行。

肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項：

a.發(fā)育程度：有無生長、微弱帶來全新智能、中等將進一步、旺盛；

b.混濁度：有無及程度（混提供有力支撐、中等實際需求、微混、透明）發展成就、均勻混濁性能、有顆粒、絮狀生長優勢；

c.沉淀：有無及量多少設計、性狀（粉狀、顆粒狀協調機製、絮狀設備製造、沾性）；

d.表面：有無生長高質量發展、性狀（膜狀資源配置、環(huán)狀）、菌膜厚薄及表面特征（光滑攻堅克難、顆粒機遇與挑戰、皺狀）；

e.其他：有無特殊氣味相關，色素取得明顯成效。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無氣體。

（5）穿刺接種法（半固體接種）

多用于保存菌種影響力範圍、觀察動力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細菌的某些生化反應大力發展。

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管；

②以滅菌接種針從菌種管取菌雙向互動，垂直刺入培養(yǎng)基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達近管底部（但不能刺到管底）集成技術，接種針應沿原路退出；

③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到：沿穿刺線生長綠色化，線外的培養(yǎng)基清亮表示細菌無動力設計；穿刺線模糊不清，或沿穿刺線向外擴散生長至關重要，或整個培養(yǎng)基混濁表示細菌有動力主動性。

二、分離純化

1、幾個定義

混和培養(yǎng)物：含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（Mixed culture）範圍；

純培養(yǎng)：如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞效果，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（Pure culture）；

分離純化：在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物求得平衡，得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化。包括傾注平板法道路、涂布平板法面向、平板劃線法等等。

2開展試點、傾注平板法（倒平板）

將無菌培養(yǎng)皿放入生物安全柜或凈化臺中集中展示，然后分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿規劃，使培養(yǎng)基均勻分布建設，待凝固之后，把這平板倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)發展。單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述步驟數(shù)次推進一步，便可得到純培養(yǎng)物探索創新。整個操作過程應嚴格按照無菌操作。

三發行速度、微生物的培養(yǎng)方法

微生物的生長極致用戶體驗，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響積極拓展新的領域，如營養(yǎng)物濃度、溫度與時俱進、水分應用、氧氣、pＨ等更優質。微生物的種類不同成就，培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同。通常分為：

1項目、一般培養(yǎng)法（需氧培養(yǎng)）    

培養(yǎng)溫度：25~37℃ 相對開放。

2、厭氧培養(yǎng)方法

（1）簡易的厭氧培養(yǎng)法：

A綜合運用、庖肉培養(yǎng)法

B相貫通、鐵絲圈厭氧培養(yǎng)法

C、焦性沒食子酸法

（2）厭氧罐法

（3）厭氧手套箱法

厭氧缸法：

厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境系統，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來的方法。

接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)方法。

厭氧罐法：

裝入待培養(yǎng)的對象生產創效，然后密閉罐蓋，接著可采用抽真空→灌氮→抽真空→灌氮→抽真空→灌混合氣（N2∶CO2∶H2=80∶10∶10，V/V）顯示。

3、二氧化碳培養(yǎng)法

（1）燭缸法

（2）二氧化碳置換法

（3）化學法

每一升用重碳酸鈉0.4克與濃鹽酸0.35亳升加入大局。

（4）二氧化碳培養(yǎng)箱法

四首要任務、微生物常規(guī)鑒定技術

1、形態(tài)結構和培養(yǎng)特性觀察

（1）在固體培養(yǎng)基上新型儲能，觀察：

菌落大小深入實施、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）不同需求、光澤度業務指導、透明度、質地發展空間、隆起形狀創造性、邊緣特征及遷移性等；

（2）在液體培養(yǎng)中：

表面生長情況（菌膜就此掀開、環(huán)）混濁度及沉淀等能力；

（3）半固體培養(yǎng)基穿刺接種：

觀察運動、擴散情況總之。

2長足發展、染色鏡檢

（1）染色原理

由于微生物細胞含有大量水分，機體是無色透明的足了準備，與周圍背景沒有明顯的反差規模設備， 必須進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差穩步前行，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結構至關重要。

微生物中細菌、致病菌是很小的生物體指導，必須通過染色的方法建設項目，在顯微鏡下才能看得清楚，并且還可以通過染色的方法鑒別革蘭氏染色特性服務品質，以及是否長有鞭毛傳遞、周毛充分、莢膜和芽孢等。

（2）染色方法

①簡單染色法

簡單染色法又叫作普通染色法戰略布局，只用一種染料使細菌染上顏色重要工具，觀察細菌的形態(tài)。

②復染色法

用兩種或多種染料染細菌更加堅強，目的是為了鑒別不同性質的細菌提供有力支撐，所以又叫鑒別染色法。主要的復染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法配套設備。

（3）革蘭氏染色法

①原理

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法發展成就。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。

染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌建議，用G+表示優勢；

染色反應呈紅色的稱為革蘭氏陰性細菌，用G―表示。

細菌對革蘭氏染色的不同反應品率，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。

②細菌的革蘭氏染色步驟

涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復染→水洗→干燥→觀察

A）取培養(yǎng)物分別做涂片推進高水平、干燥開展面對面、固定，方法均與簡單染色的相同不斷發展；

B）用草酸銨結晶紫染色1min后水洗便利性；

C）加碘液媒染1min后水洗；

D）斜置載玻片非常重要，滴加95％乙醇脫色實事求是，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時20～30s行動力，隨即水洗結構；

E）用蕃紅染液復染30s，水洗持續；

F）用吸水紙吸掉水滴情況，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察高品質，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色互動講。