技術(shù)文章
Technical articles酶標(biāo)儀基本知識(shí)及其檢測(cè)原理
酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)"就是使用一種對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定註入新的動力;而“雙波長(zhǎng)"則除了用對(duì)顯色具最大吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定外主要抓手,同時(shí)用對(duì)特異顯色不敏感的波長(zhǎng)如630 nm進(jìn)行測(cè)定研學體驗,酶標(biāo)儀最后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差能力。630 nm波長(zhǎng)下得到的吸光度是非特異的,來(lái)自于板子上諸如指紋培訓、灰塵表現明顯更佳、臟物等所致的吸收更加廣闊。因此,在ELISA比色測(cè)定中技術先進,最好使用雙波長(zhǎng)示範,且不必設(shè)空白孔。
二提高、測(cè)定的吸光度范圍
通常發展基礎,酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定范圍在延伸。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測(cè)定要求。早期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度一般在0-2.5之間要求,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,可達(dá)到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性運行好。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測(cè)定范圍為0-3.5國際要求,而Multiskan Ascent的吸光度測(cè)定范圍(Abs)達(dá)0-4.0,在0-4.0范圍同期,線性誤差不超過(guò)±2.0%新趨勢,在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi),測(cè)定精密度CV小于±0.2%貢獻;3.0-4.0 Abs范圍內(nèi)廣泛應用,測(cè)定精密度CV小于士0.2%。因此持續,對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍情況,主要要看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
三高品質、光學(xué)系統(tǒng)
酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道等多個領域,亦有單通道)檢測(cè),一般為硅光管或光導(dǎo)纖維統籌,除測(cè)定通道外哪些領域,有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道,每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)產品和服務。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何像一棵樹,均可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度范圍、線性度不斷創新、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來(lái)高效利用。光學(xué)系統(tǒng)好的話,則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳去突破。測(cè)定的精密度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系品質。單通道可避免因通道不同所致的差異。
四、檢測(cè)速度
酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度是指其完成比色測(cè)定所需要的時(shí)間能運用。檢測(cè)速度快,有利于提高檢測(cè)的精密度參與水平,即避免由于測(cè)定過(guò)程中講理論,因測(cè)定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標(biāo)儀檢測(cè)速度都非常快最為顯著,通常在數(shù)秒鐘內(nèi)滿意度,如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2和MK-3檢測(cè)96孔只需2s(連續(xù)模式)或5s(步進(jìn)模式)。Multiskan Ascent為單通道檢測(cè)生產能力,亦只需9s(連續(xù)模式)或14s(步進(jìn)模式)。又如BioRad公司的Benchmark的檢測(cè)速度單波長(zhǎng)為7s規定,雙波長(zhǎng)為15s可持續。
五、震板功能
酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔進(jìn)行比色測(cè)定前對(duì)其進(jìn)行振蕩混勻銘記囑托,使板孔內(nèi)顏色均一事關全面。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標(biāo)儀均有震板功能,所不同的是震板方式製造業,有的可按上下發展目標奮鬥、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié),如Labsystems的MK-2狀態;有的則較為固定規劃,如BioRad 550。使用有震板功能的酶標(biāo)儀更多的合作機會,在進(jìn)行ELISA測(cè)定顯色反應(yīng)完成加入終止劑后應用前景,可不必振蕩混勻,直接放人酶標(biāo)儀上測(cè)定即可可以使用。
六兩個角度入手、溫育功能
溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動(dòng)精確地控制儀器內(nèi)部的溫度,使得ELISA測(cè)定中微孔板條的溫育過(guò)程可在儀器內(nèi)部完成廣泛認同,而無(wú)需再外配溫箱進入當下。目前,只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能服務好,如Labsystems公司的Multiskan Ascent首次,BioRad公司的Benchmark和Biotek公司的ElxS08等。溫育功能只是酶標(biāo)儀的一個(gè)附加功能應用領域,是否具有并不能說(shuō)明酶標(biāo)儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣創新為先。作為實(shí)驗(yàn)室是否選擇,則可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的條件及需要來(lái)決定統籌推進。